курсовые,контрольные,дипломы,рефераты
ш0.7 Снять ?
2НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ 0 (ПРОДОЛЖЕНИЕ)
ЭНДОЦИТОЗ И ЭКЗОЦИТОЗ
Фагоциты
способны осуществлять
┌────────────┴─────────────┐
│ │
либо фагоцитоз (=эндоцитоз) либо экзоцитоз
(если объект меньше фагоцита) (=внеклеточное переваривание),
если объект больше фагоцита
│
Неспецифичекий протеолиз
в кислой среде (зоне ишемии),
ПОЛ (= перекисное окисление
липидов)
│
Деструкция самого фагоцита,
объекта и "окружения" (клеток-
"свидетелей", ткани)
= инициация ВОСПАЛЕНИЯ
(при скоплении лейкоцитов)
Реакции эндоцитоза делятся на 3 типа: пиноцитоз, кэппинг и
фагоцитоз.
1. ПИНОЦИТОЗ поглощение частиц размером до 0,1 мкм без пот-
ребления мембраны (липопротеинов, вирусов).
2. РЕЦЕПТОР-ЗАВИСИМЫЙ ЭНДОЦИТОЗ /1559к/84/ - КЭППИРОВАНИЕ
(кэппинг) /от англ. "сар" - шапка, шапкообра-
зование/ - это организованное движение диффуз-
но распределенных молекул в плоскости мембраны, приводящее к их
накоплению (шапка под люминисцентным микроскопом) на одном или
нескольких участках мембраны с последующим втягиванием (поглоще-
нием) внутрь.
Рис.
Например, кэппирование
- иммунных комплексов через Fc-рецепторы,
- комплексов HLA II класса + антитела к ним;
- комплексов С-РБ-лиганд,
- лигандов С3в-рецепторов,
- холерного токсина через ганглиозид GM1 (мембранный рецеп-
тор) на лимфоцитах. /1994/80/
Механизм: участвует кальмодулин /7526/; переход золь-гель
Кэппактнины - класс белков, которые кэппируют концы актиновых
филаментов. Время кэппинга - 10 минут. /1994/
Рецепторы с лигандами легко диссоциируют при рН ниже 5,5.
Механизм закисления среды внутри эндосом не ясен, однако из-
вестно, что в мембранах эндосом имеется фермент, который ис-
пользуя энергию, запасенную в молекулах АТФ, перекачивает про-
тоны внутрь везикул. (Избыток протонов означает понижение рН.)
Рецепторы, связанные с мембраной, вновь реутилизируются.
/1559к/84/
3. РЕЦЕПТОР-ЗАВИСИМЫЙ ЭНДОЦИТОЗ (и рецептор-независимый) -
ФАГОЦИТОЗ - поглощение и внутриклеточное переваривание (с пос-
ледующим экзоцитозом) микробов, чужеродных и отмерших тканей
организма, поврежденных клеток. (От слов греч. "phagos" - пожи-
раю, "сytos" - клетка.)
3Рецептор-зависимый экзоцитоз 0 происходит, если объект не мо-
жет быть из-за больших размеров поглощен фагоцитом (агглютинат
микробов, ПИК, часто собственная клетка организма человека и
пр.). Фагоцит выбрасывает содержимое лизосом, в т.ч. МПХ, акти-
вирующую ПОЛ. В итоге деструктируются не только взаимодействую-
щие компоненты, но и окрующая ткань (клетки-свидетели). Образу-
ется зона микронекроза. (Данный механизм осуществляется при
развитии аутоиммунных заболеваний.)
- Если связь "фагоцитируемого" объекта и фагоцита осущест-
влялась через антитела (FcR), механизм именуется как АТ-ЗКЦ
(АТ-зависимая клеточная цитотоксичность);
- если через фрагменты комплемента, то С-ЗКЦ (комплемент-за-
висимая клеточная цитотоксичность
- если через лектиновые рецепторы, то лектин-ЗКЦ;
- если через рецепторы к фибронектину или рецепторы к СРБ,
то фибронектин-ЗКЦ или СРБ-ЗКЦ и т.д.
3Исторический аспект
Явление фагоцитоза открыл И.И.Мечников в 1893г., наблюдая
как клеточные личинки морской звезды поглощают краску), за что
ему в начале века была присуждена Нобелевская премия.
4Только что введеннные в кровь бактерии моментально исчезали
4из нее. /293/ 0
До 1969г. фагоцитирующие клетки включали в т.н. ретикуло-эн-
дотелиальную систему, а в 1969г. R.van Furth и соавт. предложи-
ли термин "система мононуклеарных фагоцитов" (СМФ).
3Гистологический аспект
2Система мононуклеарных фагоцитов (СМФ) 0 включает:
- клетки Купфера печени, альвеолярные макрофаги, гистиоциты
соединительной ткани, клетки микроглии цнс, остеокласты, макро-
фаги лимфатических узлов, селезенки.
85-95% фагоцитирующих клеток организма сосредоточено в пече-
ни и селезенке.
СМФ делится на
1. внутрисосудистую (гистиоциты селезеночной пульпы, костно-
го мозга и лимфатических синусов) и
2. тканевую. Последняя в нормальных условиях состоит из по-
коящихся клеток (длительность жизни от 20 до 60 дней), становя-
щихся активированными гистиоцитами в случаях агрессии. /5987/86/
Активация СМФ происходит под действием ряда бактериальных
продуктов, токсинов, иммунных комплексов, стимулированных
Т-лимфоцитов, лимфокинов.
И.И.Мечников подразделил фагоциты на микрофаги (гранулоциты)
и макрофаги.
1. 2Микрофаги 0 имеют запас гликогена, поэтому обеспечивают ос-
новную защиту в анаэробных условиях (в очагах гнойного воспале-
ния при острых инфекциях). Снижение числа нейтрофилов ниже 25%
от нормы опасно для жизни. /2269к/ Фагоцитоз у макрофагов /мо-
ноцитов/ протекает медленнее, чем у ПМЛ, но бактерицидная ак-
тивность выше, чем у ПМЛ. /7073/
2. 2Макрофаги 0 делятся на подвижные и оседлые.
а) Подвижные, циркулирующие макрофаги (моноциты крови, гис-
тиоциты, полибласты) осуществляют хемотаксис. Присутствуют в
селезенке, ЛУ перитонеальной полости. Имеют пероксидазную ак-
тивность в лизосомах. Являются Iа 5+ 0-клетками, т.е. АПК.
/81-12-53-135/
б) оседлые (кпд >>>: если лейкоциты прикрепляются к волок-
нистым структурам, то фагоцитоз идет намного эффективнее).
Оседлые сосредоточены в синусоидах печени и некоторых других
органов, в тканях, серозных полостях, в легких. Имеют С3-рецеп-
торы. Содержат пероксидазу в ЭПС. Не способны представлять ан-
тиген лимфоцитам. /81-12-53-135/
_3 типа гранул .:
1. МПХ, лизоцим, катионные белки. Содержимое гранул первой
группы стимулирует "окислительный взрыв". /1365к/94/
2. Лактоферрин, лизоцим.
(Лактоферрин и катионые белки в макрофагах не обнаружены; в
них меньше МПХ). /307/
5Второй тип гранул включает ферменты типа катионных белков,
5протеаз, лактоферрина и фосфолипады А2. /1365к/94/
3. кислые гидролазы.
4Макрофаги имеют 2 типа гранул: специфические (цитохромы, пе-
4роксидаза, гиалуронидаза, нейтральные протеазы, активатор плаз-
4миногена, эластаза, коллагеназа) и азурофильные. При дефиците
4специфических гранул нейтрофилов воспалительная реактивность
4снижается, развиваются тяжелые рецидивирующие бактериальные ин-
4фекции. /7073/ 0
4Бета-2-микроглобулин в нейтрофилах (65% находится в специфи-
4ческих гранулах, 20% - в секреторных везикулах). /2361к/94/ 0
Дефензины - пептиды, богатые аргинином и цистеином с М. око-
ло 4 кД. Обладают широким спектром активности, в т.ч. модулиру-
ют взаимодействие нейроэндокринной и иммунной систем. Оказывают
стресс-протективное действие. /2287к/
Показателем защитной функции ПМЛ является уровень щелочной
фосфатазы (при воспалительных процессах он возрастает). /7073/
ФУНКЦИИ ФАГОЦИТОВ
1. фагоцитарная (удаление из организма отмирающих или мертвых
клеток; их фрагментов; агрегатов белков; частичек пыли и пр.),
2. синтетическая (фагоциты синтезируют компоненты комплемен-
та, интерлейкины, интерферон и др. БАВ),
3. антигенпрезентирующая (макрофаги/моноциты).
4. участие в воспалительных реакциях.
3Биохимический аспект
Факторы, участвующие в деструкции
фагоцитированного материала
──────────────────────────────┬────────────────────────────────
Кислород-зависимый механизм │ Кислород-независимый механизм
──────────────────────────────┴────────────────────────────────
МПХ (миелопероксидаза) Лизоцим
О 42 5- 0 (супероксид анион) Лактоферрин
0Н 5- 0 (гидроксильный радикал) Катионные белки
51 00 42 0 (синглетный кислород) Нейтральные протеазы
Н 42 0О 42 0 (перекись водорода) Кислые протеазы
Дефензины /2287к/
NO оксид азота /?/
───────────────────────────────────────────────────────────────
Кислая фосфатаза, липаза, эластаза, бета-глюкуронидаза и ка-
тепсины важны в переработке антигена для взаимодействия с моле-
кулами HLA класса II. Обычно именно по ним идентифицируют лизо-
сомы.
2Макрофаги 0 имеют обширную сеть митохондрий и шероховатой ЭПС,
поэтому в основном "работают" в аэробных условиях в борьбе с
внутриклеточными микробами (спирохетами, грибами, туберкулезной
палочкой). [Часто происходит организация мононуклеаров в грану-
лемы.] Макрофаги делятся на Ia 5+ 0(мышей) - участвующие в иммунном
ответе, и Ia 5- 0, фагоцитирующие через Fc-, С3в и др. рецепторы.
_Регуляция фагоцитоза
───────────────────────────────┬───────────────────────────────
СТИМУЛИРУЮТ │ ИНГИБИРУЮТ
───────────────────────────────┼───────────────────────────────
Интерферон │ ТФР-бета (тромбоцитов ...)
Лейкоцитарная масса │
ЛПС грамотрицательных микробов │ Аминогликозиды (< хемотаксис)
(перекрестная стимуляция ЛПС │ Тетрациклины /7506/
и др. продуктами микробов) │ Экзотоксины бактерий
СРБ │ Некоторые эндотоксины бактерий
Пептидогликаны │ Цитохалазин В
ЕКК /2277к/ │ Конконавалин А
Т-лимфоциты /2277к/ │ Гидрокортизон (подавляет хе-
Лимфокины сенсибилизированных │ мотаксис;стабилизирует мемб-
лимфоцитов │ рану)
ФГА │ Преднизолон (-"-)
Тафтсин │ Спленэктомия
Опиатные пептиды (хемотак- │ Тиазиды
сические агенты) /7518/ │ Индометацин (аспирин не вли-
Вещество Р │ яет) на образование О 42 5-
Аскорбиновая кислота (вит. С) │ /21Э118-82/
Никотиновая кислота │ аминофиллин
Рифампицин /7506/ │ Pg E1
Ретиноиды (синтетические анало-│ холерный токсин
ги витамина А) │ Антимакрофагальная сыворотка
Секрет слюнных желез пиявок │ Торотраст
/2399к/ │ рентгеновское облучение
Пептиды рога сайгака (сайги) │ коллоидное золото (миокристин)
│ Химически индуцированный
│ канцерогенез
───────────────────────────────┴───────────────────────────────
Клетки могут поглощать значительную часть своей плазматичес-
кой мембраны (до 50% поверхности в час.). /1559к/84/
Самым сильным, специализированным индуктором макрофагальной
активации является гамма-ИФ. Он может индуцировать экспрессию
более 100 различных генов в геноме макрофагов. /2461к/95/
ИЛ-4 и ИЛ-13 повышают экспрессию макрофагальных маннозных
рецепторов - ММR - маркеров "альтернативной" активации макрофа-
гов). Up-регуляция MMR под влиянием ИЛ-4, ИЛ-13 и Pg E может
быть необходима для вновь рекрутированных моноцитов/макрофагов,
обеспечивающих неспецифический клиренс. /2461к/
Гамма-ИФ и ФНО-альфа, вызывающие "классическую" активацию
макрофагов, снижают количество ММР (down-регуляция) на фоне по-
вышения бактерицидности, цитотоксичности и проявления других
признаков усиленной функциональной активности клеток. Возможно,
ИФ и ФНО таким образом переключают активированные макрофаги на
более эффективный фагоцитоз через FcR и СR1 или на внеклеточную
микробицидность, связанную с секрецией супероксидных радикалов
в микроокружение. /2461к/95/
┌───────────┐ ТФР-бета,ИЛ-2,
│Т-лимфоциты├── ИФ-гамма,ИЛ-6,───┐
└───────────┘ ГМ-КСФ, │
7ф 0-ФНО, 7b 0-ФНО │
│
┌───────────┐ │
│В-лимфоциты├── - " - /?/ ──────┤
└───────────┘ │
│
┌───────────┐ альфа-ИФ,гамма-ИФ│
│ ЕКК ├── ИЛ-1,ФНО-альфа,──┤
└───────────┘ ГМ-КСФ │
│
┌───────────┐ ТФР- 7b 0 │
│ Моноциты ├── ИЛ-1,6,8, ───┤
└───────────┘ Г-КСФ,ГМ-КСФ, │
7ф 0-ФНО, 7ф 0ИФ │
│ ┌──────────┐ ИЛ-1,8, │
Бактерии,грибки,простейшие ──────┼──┤Нейтрофилы├─ФАТ,ФНО- 7ф 0│
│ └──────────┘ ГМ-КСФ │
┌───────────┐ ТФР-бета, │ ТФР-бета │
│Фибробласты├── ИЛ-6,8,ИФ-бета───┤ │
└───────────┘ Г-КСФ,ГМ-КСФ │ │
│ Другие
┌────────────┐ ИЛ-6,ИЛ-8, │ клетки
│Эндот.клетки├─ Г-КСФ,ГМ-КСФ ────┤
└────────────┘ │
│
┌───────────┐ │
│Тромбоциты ├── ИЛ-1,8 ──────────┘
└───────────┘
Схема цитокиновой регуляции антимикробной активности
нейтрофилов. /2343к/94/
_Фенотипы
5- Гамма-ИФ вызывает приобретение макрофагами "воспалительно-
5го" фенотипа.
5- Противоположный воспалительному фенотип - с пониженной
5экспрессией генов провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ФНО-альфа,
5МСР-1), пониженной цитотоксичностью, усиленной продукцией ИЛ-6.
5Такой фенотип могут вызвать катехоламины (через альфа- и бе-
5та-адренергические рецепторы), вызывающие повышение уровня
5внутриклеточного цАМФ. /2461к/
5- Под влиянием ИЛ-4, ИЛ-13, Pg E макрофаг приобретает "асим-
5метричный" фенотип с избирательной активацией "scavenger" ре-
5цепторов типа ММR. /2461к/
5- В затухающем очаге воспаления (в присутствии ИЛ-6) форми-
5руется иной фенотип. /2461к/
Подавление фагоцитоза может привести к инфекционным заболе-
ваниям, паразитарным инвазиям, злокачественным новообразовани-
ям (тумороцидный эффект макрофагов - ПОЛ), гемобластозам.
Активированные нейтрофилы выделяют ИЛ-1. /2277к/
_ 2Дефекты фагоцитоза
Снижение фагоцитарной активности может быть обусловлено сле-
дующими дефектами.
1. 1Дефект подвижности 0 (хемотаксиса) фагоцитов (синдром "ле-
нивых лейкоцитов") - рецидивирующие или хронические бак-
териальные инфекции кожи, пазух, легких, среднего уха,
десен. /7514/ Дефект связывания актина. Развивается при
недоедании. Лейкоциты в меньшей степени накапливаются в
кожных окнах. /7685/82/
2. 1Дефект поглощения 0 частиц (острый лейкоз, апластическая
анемия). Дефект фагоцитоза может быть после лечения сте-
роидами. /7685/82/
3. 1Дефект образования гранул и дегрануляции 0, причем возможен
дефект образования
- азурофильных гранул (первичный дефицит МПХ /см. ниже/,
миеломоноцитарный лейкоз, миелобластный лейкоз, острый
миелолейкоз),
- специфических гранул (сочетается с нарушением хемотак-
сиса и противомикробной активности нейтрофилов),
- а также тех и других - 1синдром Чедиака-Хигаши 0(неспо-
собность к формированию нормальных фаголизосом; леталь-
ный исход в детском возрасте); /313/
4. 1Дефект внутриклеточного метаболизма 0 (облучение, хроничес-
кий гранулематоз, ревматоидный артрит, фиброз легких).
/7476/83/ Фагоциты поглощают микробы, но не убивают их.
/7073/
а) _Хроническая гранулематозная болезнь . (ХГБ; нарушение
продукции метаболитов кислорода) - первичное ИД-ое
состояние, возникающее из-за отсутствия или дисфункции
НАДФ-оксидазы в фагоцитах. В итоге не запускается кис-
лородный взрыв, не образуется перекись водорода. Для
больных характерен отрицательный NST-тест (с нитроси-
ним тетразолием).
Различают 2 варианта семейной передачи болезни:
Х-сцепленный (болеют мальчики) и аутосомно-рецессивный
/2225к/95/ - отсутствие цитохрома "b" в нейтрофилах.
Приводит к незавершенности фагоцитоза. /7073/
5Идентифицировано несколько мембранных и цитозольных
5компонентов НАДФ-оксидазы (клонировано соответственно
5нескольк ДНК-последовательностей). Мембранные - цитох-
5ром b558 (состоящий из пептидов gp91-фокс и р22), в
5цитоплазме - полипептиды р47-фокс и р67-фокс (название
5компонентов "фокс" = phox от Phagocyte oxydase). В
5процессе активации клетки оба протеина перемещаются в
5мембрану, где вместе с цитохромом b558 образуют функ-
5циональную оксидазу. /2225к/95/ 0
4- От 60 до 70% всех случаев болезни - Х-сцепленный
4вариант (кодирующий ген в половой хромосоме), связан-
4ный с дефицитом gp91-фокс; 0
4- менее 55% всех случаев - дефект р22-фокс (кодиру-
4ющий ген - в 16 хромосоме и поэтому заболевание пере-
4дается аутосомно-рецессивным путем). /2225к/95/ 0
4- Дефекты р47-фокс ответственны за 20% случаев ХГБ
4(кодирующий ген расположен в 7 хромосоме; заболевание
4передается аутосомно-рецессивным путем). /2225к/95/ 0
4- Дефекты р67 ответственны за 5% ХГБ (белок кодиру-
4ется в 1 хромосоме; передача аутосомно-рецессивным пу-
4тем). /2225к/95/ 0
Заболевание характеризуется:
-падением продукции перекиси водорода в фагосомах,
- у мальчиков отсутствует НАД- и НАДФ-оксидаза,
- у девочек отсутствует ГПХ (есть часть заболевших
среди девочек); /7685/
Хирургическое лечение + антибиотики позволяют вы-
жить до 20-30 лет. /7685/
При хроническом гранулематозе наиболее частое инфи-
цирование аспергиллами. /7685/82/
Поскольку в фагоцитах микробы защищены от антибио-
тиков, заболевание сопровождается хроническими бакте-
риальными инфекциями (в частности, стафилококковыми),
воспалением различных органов и тканей, септическими
осложнениями. Осложнения в виде абсцессов легких, пе-
чени, брюшной полости. (Сепсиса, абсцессов мозга и ме-
нингита почти не бывает-?). /7514,7524/ Одна треть
(1/3) больных погибает до 7 лет. Поэтому заболевание
называется 1гранулематозом детского возраста (синдром
1Джоба) 0. /313/
б) 1Недостаточность миелопероксидазы 0 (МПХ). При недоста-
точности МПХ больные восприимчивы
- к кандидам и
- стафилококковой инфекции (лечение антибиотиками).
/7685/82/
- клебсиеллам
- кишечной палочке,
- серрациям,
- сальмонеллам
- микобактериям,
- аспергиллам
- псевдомонас и др., имеющим каталазу. /2225к/
5. 1Дефект опсонизации 0 - низкий уровень комплемента или анти-
тел. Наблюдается при миеломе, агаммаглобулинемии, пораже-
ниях печени. У таких больных отмечаются повторные респи-
раторные инфекции, обусловленные инкапсулированными пнев-
мококками или Haemophilus influenzae. /7514/
6. 1Лейкопения 0. Нейтрофилия в крови развивается при первичных
иммунодефицитах, синдроме Костманна, хронической идиопа-
тической нейтропении, синдроме Швахмана, сепсисе, тимоме,
наличии антител к нейтрофилам, нарушении функции Т-суп-
рессоров, гемодиализе. /7476/
7. Нарушения в функции или количестве лейкоцитов, вызванные
лекарствами ( 1стероидами, антибиотиками 0).
_Усиленная фагоцитарная функция .. Игольчатый укол или незначи-
тельная травма без инфицирования могут привести к нагноению или
гнойному артриту. Клиническая картина у таких больных может
имитировать таковую при подавленной фагоцитарной функции, одна-
ко микробиологические исследования будут отрицательными.
/7514/87/
_ 1Фагоциты участвуют в развитии воспалительной реакции ..
1Нейтрофилы секретируют факторы, индуцирующие апоптоз разных
1клеток-мишеней ( _ 3апоцитоз . 1 окружающих клеток). В свои вакуоли
1нейтрофилы выделяют фактор, индуцирующие апоптоз (ФИА) клеток,
1которые разрушают геном микрообв. Это ферменты с высокой нукле-
1азной активностью ( _нуклеазы .). При массивном проникновении в ор-
1ганизм инфекционных агентов нейтрофилы активно поглощают микро-
1бы и, не заботясь об их истинном переваривании, выбрасывают в
1межклеточное пространство значительные количества ФИА. Цель ре-
1акции - произвести в сжатые сроки как можно более выраженное
_ 1повреждение генетического аппарата микробов .. ФИА губительны для
1всех клеток: они способны осуществить деградацию НК генома лю-
1бых биосистем - эукариотов, прокариотов, вирусов. Нейтрофильные
1ФИА индуцируют ускорение апоптоза и у самих нейтрофилов.
1/2226к/97/
1Фагоцитоз и апоцитоз - разные, но фиункционально сопряженные
1процессы. Нейтрофилы с помощью ФИА инициируют воспалительную
1реакцию. Процесс воспаления - это реакция организма на ФИА.
1/2226к/97/
1Нейтрофилы - это клетки, у которых включена генетически за-
1данная программа клеточной гибели. На поверхности нейтрофилов
1по прошествии некоторого времени появляются стркутуры, которые
1обусловлены апоптозом и которые узнаются макрофагами (САН -
1структуры апоптоза нейтрофилов). Фагоцитоз "старых" нейтрофилов
1осуществляется макрофагами. /2226к/97/ 0 - ПОВТОР
3Физиологический аспект
Этапы фагоцитоза: 1. Хемотаксис,
2. Узнавание (адгезия - прилипание частиц
к поверхности фагоцита),
3. Поглощение,
3а.Слияние фагосомы с лизосомами,
4. Переваривание.
5. Удаление "отходов". /307/
Первым необходимым условием для осуществления фагоцитоза яв-
ляется накопление макрофагов в местах присутствия антигена или
продуктов тканевого распада.
2Хемотаксис 0(приближение или аттракция; для подвижных фагоци-
тов) - направленное движение клетки по или против химического
градиента. [Ориентация на определенные сигналы - хемотаксис;
миграция - хемокинез.] Хемотаксис может быть положительным (к
хемоаттрактанту) и отрицательным ("от себя"). /307/
_Хемотаксические факторы . /7519/
- С5а, С5а-dearg фрагменты комплемента (для нейтрофилов);
При дефиците С5а ингибируется инфильтрация нейтрофилов в
очаг воспаления. Вирулентные стрептококки группы А синте-
зируют ингибитор С5а. /7508/ Пептидные ингибиторы С5а ис-
пользуются для подавления воспалительного ответа. /7511/
5- калликреин (переводящий С5 в С5а) /7330/87/
5- С3а /2291к/
- ЛТ В4;
- формил-метионил-лейцил-фенилалан,
- ФАТ /2291к,2369к/
- ИЛ-8
- ФНО-альфа
- фактор переноса (лимфокин);
- продукты распада
-- соединительной ткани (пептиды коллагена);
-- иммуноглобулинов (тафтсин - тетрапептид; воздействие
трипсина);
-- фибриногена (фибринопептид В) и другие продукты ССК;
5- факторы хемостаксиса (нейтрофильные, фибробластов, макро-
5фагов - ИЛ-1,лимфоцитов; тучных клеток для эозинофилов);
- опиатные пептиды.
- формилпептиды St.aureus, E.coli (усиливают экспрессию
CD11b/CD18 на поверхности нейтрофилов) ── 76 0 адгезия к ЭК
── 76 0 проникновение в интерстиций. /2291к/
[0-токсин Cl.perfringens подавляет хемотаксис нейтрофилов,
но не макрофагов.]
Хемоаттрактанты различного происхождения
- усиливают движение,
- в 10-20 раз повышают экспрессию рецепторов (нейтрофилов)
/2369к/
-- стимулируют экспрессию молекул адгезии /2291к/
-- увеличивают экспрессию рецептора для С3в (СR1).
Скорость движения макрофагов - 20 мк в минуту.
2Узнавание (адгезия) 0:
1. 1Непосредственная адгезия 0 (неопсонизирующее распознавание)
проходит по следующим механизмам:
а) Взаимодействие по электростатическому _заряду . (поглоще-
ние полианионов). Показано, что перитонеальные макро-
фаги и купферовские клетки имеют поверхностные рецеп-
торы к анионным частицам. /7522/
б) Поглощение _гидрофобных частиц . (если объект более гид-
рофобен, чем макрофаги). Большинство бактерий имеют
гидрофобную природу и легко захватуваются фагоцитами.
/307/ Комплемент повышает гидрофобность фагоцитируемых
частиц и т.о. усиливает фагоцитоз. Фагоциты имеют мно-
жество участков связывания липида А (ЛПС Г- микробов).
(11.53.304-91)
в) _Интегрины и селектины . (поверхностные рецепторы). С по-
мощью селектинов осуществляется "качание" (rolling)
фагоцитов на поверхности ЭК перед их твердым приклеп-
лением спомощью интегринов к этой поверхности. /2291к/
Интегрины: три гетеродимера, состоящие из общей бе-
та-цепи (CD18) и трех альфа-цепей (CD11a, CD11в,
CD11с). /2291к/
5Интегрин В 43 5 играет главную роль в узнавании апоптоти-
5ческих нейтрофилов. /7964/90/ 0
На фагоцитах 2 вида селектинов: L (CD62L) и E (CD62E).
/2291к/
г) Синтез _N-ацетилглюкозаминидазы . и тромбоксантина В 42 0 (ТХ
В 42 0) для фагоцитоза эритроцитов и зимозана (грибов).
/7964/
Без опсонинов поглощаются стрептококки, некоторые кишеч-
ные палочки, микобактерии.
2. 1Опсонин-опосредованный фагоцитоз 0 проходит через рецепторы
к опсонинам (комплемент-зависимая и др.; антителоза-
висимая, т.е. неспецифическая и специфическая) - вещест-
вам, взаимодействие которых со своими рецепторами приво-
дит к фагоцитозу.
_Опсонины . /7523/
1. Ig G1, Ig G3 - взаимодействие через Fc-рецепторы (ан-
тителозависимый или специфический фагоцитоз); Ig
А,М,Е,D практически лишены опсонизирующей активности.
2. Фрагменты комплемента
СR1 - рецептор для С3b, C4b, C5b, С5b67 /?/
CR2 - рецептор для С3d
CR3 - рецептор для С3bi
C1qR -рецептор для субкомпонента С1q (не встречающего-
ся в свободном виде). Активация СR1 приводит к
стимуляции фагоцитарной активности, окислитель-
ного метаболизма и высвобождению лизосомальных
ферментов. /3032/
Например, через антитела или фрагменты комплемента погло-
щаются микробы (бактерии семейства кишечных, микоплазмы,
стафилококки и др.).
3. С-РБ /7521/, 4- рецептор-?
4. Фибронектины (рецептор для фибронектина)
5. Фибриноген, фибрин /?/
6. Рецепторы лектино-подобной природы - С1q и др. (манно-
зо-, галактозо-связывающие и др.) - поглощают объекты,
включающие в свой состав соответствующие углеводные
остатки. = _Лектин-зависимый фагоцитоз . /7520/
4С1q (мембранный С1q). Рецепторную функцию для Fc-фраг-
4ментов иммунных комплексов на макрофагах может вы-
4полнять субкомпонент С1q, который перед выделением
4из клетки включается в мембрану. /3014,3017-255/
На макрофагах обнаружены лектины со специфичностью
к галактозе и к N-ацетилгалактозамину; на альвеолярных
макрофагах и клетках Купфера - лектины маннозного ти-
па. Данный лектин связывается помимо маннозы с N-аце-
тилглюкозамином, глюкозой и фукозой (Г- бактерий, ми-
кобактерий, дрожжей). /7322/88,7513/ Такое взаимодейс-
твие обеспечивает сборку на белке комплексов С1r 42 0-C1s 42
и активацию КПК, т.е. С3в-опсонизацию. Белок, связыва-
ющий маннозу, подобен С1q-субкомпоненту комплемента:
М. 700 кД, состоит из повторяющихся единиц (32кД).
Низкий уровень белка, связывающего маннозу, (<30
мкг/л) связан с повторными инфекциями в возрасте от 6
месяцев до 1,5 лет. /7513/
5Имеется маннансвязывающая протеаза, способствующая
5самоактивации С1r и С1s и таким образом определяющая
5лектиновый путь активации комплемента. /7234/94/ Ман-
5нозо-связывающая сериновая протеаза проявляет С1s-по-
5добную активность и таким образом активирует компле-
5ментарный каскад. /1995г./
7. Рецепторы углеводной природы, взаимодействующие с лек-
тинами чужеродных объектов (микробов и пр.).
На поверхности фагоцитов имеются интегральные лектины и
структурные карбогидраты (мишень для лектинов бактерий),
поэтому связывание происходит двумя путями (Рис. ) Карбо-
гидраты микроорганизмов связываются с лектинами фагоци-
тов.
5(При экспериментальном заражении животных двумя штам-
5мами бактерий - несущих и не имеющих поверхностных лекти-
5нов, поглощались лишь бактерии, несущие лектин; бактерии,
5не имеющие лектина, избегали фагоцитоза и пролиферировали
5в организме хозяина. /7517/)
Третья стадия фагоцитоза - 2поглощение 0 проходит за счет сок-
ращения актомиозиновых нитей; мембрана закрывается как застеж-
ка-молния.
Мелкие частицы захватываются при волнобразных перемещениях
складок клеточной мембраны. Для поглощения более крупных частиц
и клеток (эритроцитов, бактерий) типично обтекающее движение -
образование псевдоподий. Фиксированные макрофаги для фагоцитоза
бактерий из кровеносного русла могут "выдвигать" длинные цитоп-
лазматические отростки между эндотелиальными клетками. Если
объект диаметром более 10 мкм, его могут поглощать сразу нес-
колько макрофагов: объект частично дезинтегрируется, фагоцити-
руется и переваривается по фрагментам. /307/
После 50%-ой утилизации мембраны при фагоцитозе с утратой
большинства поверхностных маркеров восстановление ее происходит
после лаг-фазы продолжительностью 4-8 часов и требует интенсив-
ного синтеза РНК и белка (фосфолипидов,холестерина)./350/
Образование фаголизосом (слияние с азурофильными гранулами и
лизосомами). В аутофагосомах содержатся компоненты самих клеток
хозяина (осколки мембран, митохондрии и др.).
Четвертая стадия - 2переваривание 0.
Слияние с лизосомами. _Лизосомы . - гранулы с диаметром
0,25-0,5 мкм, содержащие большой набор ферментов (кислая фос-
фатаза, бета-глюкуронидаза, МПХ, коллагеназа, фагоцитин, лизо-
цим, катионные белки /лактоферрин, дефензины и пр./). /307/
5В настоящее время особо важное значение придается дефензинам
5- богатым аргинином белкам, которые обладают способностью
5встраиваться в липидный слой клетки, нарушать ее проницаемость
5и убивать широкий спектр бактерий, грибов и даже вирусов.
5/2291к/
Первыми вливают свое содержимое в фагосому _специфические
(или вторичные) _гранулы ., содержащие лизоцим, лактоферрин, бе-
лок, связывающих витамин В 412 0 и пр. Вторыми - _азурофильные . (или
первичные) гранулы, содержащие набор гидролаз, МПХ. /2291к/
Наступает _дыхательный и метаболический взрыв . (в частности,
под действием ЛПС Г- микробов). Наблюдается повышенный оборот
фосфолипидов и холестерина, 3-кратное увеличение поглощения
кислорода и глюкозы, активности НАДФ-оксидазы, усиливается гли-
колиз, повышается продукция перекиси водорода, активируется
гексозомонофосфатный шунт.
4В результате дыхательного взрыва происходит окисление суль-
4фгидрильных групп мембранных белков до дисульфидов. Процесс ло-
4кальной полимеризации продолжается до тех пор, пока поглощаемая
4частица не будет полностью окружена мембраной. /7527/
Для осуществления движения гранулоциты человека нуждаются в
присутствии экзогенной глюкозы, тогда как их фагоцитирующая ак-
тивность зависит от способности сохранять гликоген. /7532,1831,
1601/ Основным источником АТФ фагоцитов является гликолиз, для
альвеолярных макрофагов - окислительное _фосфорилирование ..
/1770/ 4Как и в скелетной мышце, в макрофагах содержится
43-4-кратный молярный избыток креатинфосфата над АТФ. При фаго-
4цитозе снижается содержание креатинфосфата (уровень АТФ не ме-
4няется). 0
Биохимические изменения в метаболизме моноцитов во время
поглощения:
- Увеличение аэробного и анаэробного гликолиза, гликогенолиза,
- Повышение потребления кислорода,
- Увеличение утилизации глюкозы по гексозо-монофосфатному шун-
ту
- Повышенный оборот фосфолипидов и холестерина
- Временное увеличение концентрации лизосомальных ферментов
- Накопление перекиси водорода
- Секреция пирогенов
а _) Ферментативная деструкция (кислород-независимый процесс) ..
Ведущим механизмом деструкции является синтез активных форм
кислорода (супероксиданиона, синглетный килород, перекись водо-
рода, 5. 0ОСl, 5. 0ОBr, 5. 0OJ (галогенизированные формы образуются при
участии миелопероксидазы - МПХ). /2689к/
Кислороднезависимые механизмы проходят преимущественно в
гнойном очаге.
При снижении в лизосомах рН (<7), т.е. через 7-8 минут после
поглощения начинают работать бета-галактозидаза, бета-глюкуро-
нидаза, коллагеназа, липаза, эстеразы, лизоцим, кислая щелочная
фосфатаза, лактоферрин.
В результате все большего присоединения азурофильных гранул
рН снижается до 4,5 (средняя рН лизосом - 4,7 - 4,8). Расщепле-
нием убитых микробов начинают заниматься 2кислые протеазы 0 - ка-
тепсины и др. (Насчитывают более 80 кислых гидролаз.) Концент-
рация ферментов постепенно увеличивается.
Оптимум рН для катепсина А - 5,0,
катепсина В - 4,8,
катепсина С - 6,0,
катепсина Д - 3,2 и 4,5,
катепсина Е - 2,5. /7475/83/
б _) Деструкция радикалами (кислород-зависимый процесс); 2ПОЛ 0.
Поглощение микроба фагоцитом сопровождается окислительным
взрывом, в процессе которого _НАДФ-оксидаза . катализирует образо-
вание мощных антимикробных агентов путем превращения молекуляр-
ного кислорода в О 42 5- 0. Образование других высокоактивных кисло-
родных метаболитов - перекиси водорода и гидроксильного радика-
ла (ОН 5- 0) - происходит без участия ферментов, а образование ги-
похлоридного аниона (ОСl 5- 0) - при участии _миелопероксидазы
(МПХ). /2225к/95/
[Происходит резкая активация гексозомонофосфатного шунта ── 76
образование НАДФН ─── 76 0 восстановление молекул кислорода на ци-
тохроме b245. Происходит бурное потребление кислорода. В ре-
зультате образуется перекись водорода, различные радикалы кис-
лорода, МПХ запускается мощная система галогенирования, что
сопровождается гибелью микроорганизмов.
Глюкоза + НАДФ ─── 76 0 шунт ──── 76 0 пентофосфат + НАДФН
НАДФН + 0 42 0 ── 76 0 цит.в245 ── 76 0 НАДФ 5+ 0 + 0 42 5- 0(надпероксидный анион)
Фермент, обеспечивающий образование ключевого окислительного
элемента - 0 42 5- 0, представляет собой,по-видимому, мембраносвязан-
ный флавопротеид, использующий в качестве физиологического
агента НАДФ. В основе продукции супероксида лежит использование
активной формы железа и некоторых других соединений не самого
нейтрофила, а клетки-мишени. /7516/
20 42 5- 0 + 2Н 5+ 0─── 76 0 спонтанная дисмутация── 76 0 Н 42 00 42 0 + 51 00 42 0 (синглетный
кислород)
Н 42 00 42 5 0+ 0 42 5- 0 ── 76 0 51 00 42 0 + ОН 5- 0 + ОН 5. 0 (свободный гидроксил)
Н 42 00 42 0 + Сl 5- 0 ──── 76 0 МПХ ──── 76 0 ОСl 5- 0 + Н 42 00 ─── 76 0 О 42 0 + Сl 5- 0 + Н 42 00
20 42 5- 0 + 2Н 5+ 0─── 76 0 0 42 0 + Н 42 00 42 0 (фермент - надпероксиддисмутаза)
Н 42 00 42 0 ───── 76 0 каталаза ───── 76 0 2Н 42 00 + 0 42 0 ]
Сами фагоциты защищаются от радикальных форм ферментами -
антиокислительной системой (СОД, каталазой, наличием глутати-
он-восстановительной системы). Содержание пероксидазы снижено
при ревматизме, туберкулезе, инфаркте миокарда, опухолевых за-
болеваниях. /7515/
Ацетилсалициловая кислота (60 мкг/мл) не влияет на потребле-
ние кислорода и образование супероксида; индометацин ингибирует
потребление кислорода и образование супероксида. /21Э118-82/
Окислительные и другие метаболиты фагоцита по системе мик-
ротрубочек поступают внутрь фаголизосомы и обеспечивают бакте-
рицидный и тумороцидный эффект макрофагов.
В результате потребления ионов водорода (особенно в условиях
гнойного очага воспаления, не снабжающегося кислородом) повыша-
ется рН и создаются оптимальные условия для работы 2катионных
2белков 0 (катепсина G) и лизоцима. Катионные белки усиливают ге-
нерацию супероксида. /7477/88/
Деструктированные объекты окончательно перевариваются глико-
литическими, протеолитическими, липолитическими и прочими фер-
ментами фагоцитов. Мономерные субъединицы (аминокислоты, моно-
сахара, глицерин, жирные кислоты, нуклеотиды) включаются в об-
щий метаболический процесс организма, чужеродные углеводные и
др. субстанции выбрасываются в кровоток и выделяются с мочой, а
непереваренные антигенные детерминанты встраиваются в процессе
экзоцитоза в наружную мембрану, образуют комплекс с антигенами
HLA II класса и запускают иммунный ответ. Некоторые авторы счи-
тают, что фагоцитоз и функцию антигенпредставляющих клеток
(АПК) осуществляют разные субпопуляции клеток.
Образуется оксид азота (NO). /2319к/97/ Активизированные
нейтрофилы (супернатант) обладают цитотоксическими свойствами в
отношении опухолевых и ВПК. Эффект не связан с активными форма-
ми кислорода, дегрануляцией, метаболитами АК. /2319к/97/
3 2исхода фагоцитоза 0: гибель микроба, гибель фагоцита, симби-
оз. Различают завершенный и незавершенный фагоцитоз. При неза-
вершенном фагоцитозе микробы поглощаются, но не погибают и не
преревариваются, а иногда размножаются (покидают фагосому и
циркулируют в цитоплазме). В случае завершенного фагоцитоза в
дальнейшем происходит экзоцитоз (выброс продуктов деградации)
или регургитация (выброс неполностью закрытой фагосомы- ?).
4Механизмом экзоцитоза выбрасываютс из клетки белки, синтези-
4рующиеся на рибосомах ЭПС. Они переходят в цистерны эпс, затем
4аппарат Гольджи, направляются к поверхности клетки, сливаются с
4мембраной клетки и содержимое выходит из клетки.
5Микробы, которые поглощаются /350/84/
5───────────────────────────────────────────────────────────────
5без опсонизации │через комплементарные │через комплементарные
5│или Fc-рецепторы │и Fc-рецепторы
5───────────────────────────────────────────────────────────────
5шероховатые формы микоплазмы Е.с. капсулированная
5пневмококков стафилококки с (с капсульным АГ)
5стрептококки белком А сальмонеллы с Vi-АГ
5(без гиалурон.к-ты
5и М-белка)
5нек.штаммы Е.с.,
5стафилококков,
5микобактерий,
5гонококки
5───────────────────────────────────────────────────────────────
Эволюционно сформированные 2механизмы защиты микробов от фа-
2гоцитоза 0:
1) Капсулы пневмококков, сибиреязвенных бацилл, клебсиелл,
СГ и др. микробов. К-антигены кишечной палочки, сальмонелл
(капсульные АГ). Полисахариды менингококков, возбудителей чумы,
микоплазм. Если микробы декапсулировать, то они фагоцитируются.
2) Белок А стафилококка, белок М стрептококков, представляю-
щие функционально белки, подобные Fc-рецепторам (сцепление с
антителами происходит не антиген-связывающей областью
/Fab-фрагментом/, а эффекторным звеном /Fc-фрагментом/, поэтому
антитела неспецифически поглощаются, но не могут выполнить
Fc-зависимых функций - проактивировать фагоцитоз или систему
комплемента).
3) ЛПС энтеробактерий, воскоподобный слой микобактерий, гиа-
луроновая кислота стрептококков, бледной трепонемы.
4) Изменение метаболизма фагоцитов
- Пероксидаза, каталаза многих микробов (антиоксиданты бло-
кируют ПОЛ в фаголизосомах). При ряде ООИ.
- Блокада слияния фагосомы и лизосомами (у ряда микробов).
- Индукция тормозных медиаторов - ТФР-бета, ИЛ-10 макрофага-
ми (Lrishmania spp., Trypanosoma cruzi, Mycobacterium avium)
/2461к/95/ ── 76 0 подавление окислительного и пр. метаболизма,
внутриклеточная персистенция.
- Дифтерийный токсин и пр. (холерный токсин активирует =
адъювант) ── 76 0 изменение метаболизма фагоцитов.
- Изменение процессов фосфорилирования клеточных белков, ак-
тивности протеинкиназы С, Са 52+ 0-зависимого пути передачи сигна-
лов.
5) Пили гонококков препятствуют поглощению микроба.
Зачастую фагоцитоз опсонизированных антителами микробов за-
вершенный, неопсонизированных - незавершенный.
.
см. материал по практическим занятиям
2Практические занятия
- Определение абсолютного и относительного числа нейтрофилов
и моноцитов
- Определение фагоцитарной активности нейтрофилов.
ОЦЕНКА ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ
Фагоцитозом называется поглощение клетками микробов или чу-
жеродных частиц. Снижение числа нейтрофилов ниже 25% от нормы
опасно для жизни. /2269к/
┌─после комплементарного лизиса ─── АПК, КПК ── АТ
Фагоцитоз ┼─после "работы" антител (ИК) ─── уровень АТ
└─комплексов с фибронектином, альфа-2-макроглобу-
лином, С-РБ, лектинами и пр.
Для изучения поглощения используют бактериальные клетки
(St.aureus или E.coli), дрожжи, латексные частицы. Более интен-
сивно фагоциты поглощают чистицы, обработанные сывороткой, со-
держащей опсонины (Ig G, комплемента, фибронектин, СРБ и др.).
/2291к/
При определении фагоцитарной активности определяют следующие
2показатели:
- фагоцитарный показатель - процент фагоцитирующих нейтрофи-
лов к общему количеству нейтрофилов;
- фагоцитарный индекс - среднее число микробных тел, захва-
ченных каждой клеткой;
- опсонический индекс
- переваривающая способность - постепенное уменьшение ( в
течение 50-60 минут) интенсивности окрашивания фагоцитированных
микробов вплоть до их полного обесцвечивания;
- завершенность фагоцитоза - отношение лейкоцитов с завер-
шенным фагоцитозом к общему числу лейкоцитов с фагоцитированны-
ми микробами, выраженное в процентах. /272-53/
_ 2Методики . 1:
Фагоцитарную активность можно определять в условиях in vitro
и в условиях in vivo.
I. In vitro.
- Методы оценки экспрессии С3- и Fс-рецепторов по тесту РОК;
- Радиометрические методы изучения стадии захвата.
- Тест восстановления нитросинего тетразолия. По реакции
восстановления нитросинего тетразолия судят об стимуляции гек-
созомонофосфатного шунта. /1583-4/
II. In vivo.
Белым мышам вводят в/бр. 2мл стерильного МПБ, чем вызывают-
локальный лейкоцитоз. Через 4 часа в/бр. вводят 1мл 2млрд-ой
культуры Staphylococcus albus. Через 10-15 минут из перитоне-
альной жидкости готовят мазки (можно из осадка после центрифу-
гирования), окрашивают метиленовым синим.
2Незавершенный фагоцитоз 0 (наблюдается при поглощении туберку-
лезных палочек, возбудителей лепры, лейшманиоза, гонореи, ме-
нингококков, вирусов, риккетсий) :
Рис. "Незавершенный фагоцитоз гонококков (мазок in vivo)"
Показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) - процентное отно-
шение умерщвленных и всех поглощенных микробов (примерно равно
0,80). Выделяют 5 степеней завершенности фагоцитоза (ЗФ):
- высокая ЗФ (1,0-0,82);
- средняя (0,81-0,45);
- слабая (0,44-0,32);
- очень слабая (0,31-0,29)
- ЗФ отсутствует (0,28-0,25)
2Фагоцитарная активность
(фагоцитоз стафилококка)
Реакцию осуществляли по методу Н.В.Васильева и соавт.
(1972). Для постановки реакции в лунки иммунологического план-
шета вносили по 15 мкл гепарина в концентрации 10 ед/мл, 50 мкл
цельной крови, взятой с пальца натощак, и добавляли 25 мкл 2 х
10 59 0 микробных тел/мл суточной агаровой культуры Staphylococcus
aureus разведенных на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,2. В опытные
лунки вводили по 10 мкл расстворов изучаемых полипептидов, в
контрольные - 10 мкл фосфатного буфера. Лейкоцитарно-микробную
взвесь перемешивали и инкубировали при температуре 37С в тече-
ние 30 минут, повторно встряхивая каждые 5 минут. После инкуба-
ции взвесь ресуспендировали, готовили мазки, фиксировали 10 ми-
нут метанолом и окрашивали по Романовскому-Гимза.
Готовые препараты микроскопировали с использованием масляной
иммерсии и вели подсчет в 200 нейтрофилах. Поглотительную спо-
собность фагоцитов оценивали по следующим показателям:
1) фагоцитарный показатель - процент фагоцитировавших кле-
ток из числа сосчитанных нейтрофилов;
2) фагоцитарный индекс - среднее число микробов, поглощен-
ных одним активным нейтрофилом.
Для оценки переваривающей функции нейтрофилов определяли
показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) по формуле:
общее количество переваренных микробов
ПЗФ = ────────────────────────────────────── х 100 %.
общее количество поглощенных микробов
Чувствительным методом оценки функциональной активности фа-
гоцитов является метод определения хемилюминесценции крови.
/7062/
- Приготовить кровяно-микробную взвесь (0,05мл 2% цитрата
натрия, 0,1мл крови и 0,05мл 2 млрд-ой взвеси микробов - микро-
кокков);
- для определения опсонического индекса в опытную пробу до-
полнительно добавляетя антисыворотка к микробам или сыворотка
больного для определения функциональной активности антител к
микробам;
- выдержать в термостате 30 мин. при 37 50 0С.
- приготовить мазок из кровяно-микробной взвеси;
- высушить мазок, окрасить по методу Филлипсон: краситель
Романовского развести этиловым спиртом 1:3. На высушенный пре-
парат наносят 5 капель красителя и выдерживают 5 минут (однов-
ременная фиксация и окраска). Не сливая краску, добавляют во-
допроводную воду, 5 капель на 5 минут. Промывают водой, высуши-
вают, микроскопируют с иммерсией.
- В мазке определяют
а) фагоцитарный показатель - процент фагоцитирующих лейко-
цитов (среди полиморфоядерных лейкоцитов). Подсчитывают
100 гранулоцитов и, например, если 35 из них водержат
микробы, то фагоцитарный индекс равен 35%.
б) фагоцитарное число или индекс (количество микроорганиз-
мов, поглощенных одним нейтрофилом); считают суммарное
количество микроорганизмов, например, 567 во всех фаго-
цитирующих гранулоцитах /80/ и делят на число фагоци-
тов. Частное от деления (567:80=7) отражает сруднюю
поглотительную способность одного фагоцита.
в) определяют опсоно-фагоцитарный индекс (ОФИ). Для этого
либо рассчитывают частное от деления ФЧ (фагоцитарного
числа) больного на ФЧ здорового донора (при этом ОФИ
должен быть больше единицы; либо ОФИ определяют эмпири-
ческим методом, с помощью которого анализируют состоя-
ние 25 нейтрофилов по следующей схеме:
──────────────────────────────────────────────────────────────
Количество микро-│Оценка фагоцитоза│Количество нейт- │ ОФИ
бов, фагоцитиро- │ │рофилов с данной │
ванный одним │ │степенью фагоци- │
гранулоцитом │ │тарной активности│
──────────────────────────────────────────────────────────────
0 0 2 0х2=0
от 1 до 20 + (один) 5 1х5=5
от 20 до 40 ++ (два) 10 2х10=20
от 40 и более +++ (три) 8 3х8+24
Итого: ОФИ=49
Максимальное значение ОФИ - 75, т.е. во всех 25 нейтрофилах
фагоцитировано от 40 и более микробов. У здоровых людей ОФИ ра-
вен 10.
ОФИ от 10 до 24 - слабо положительный (+);
от 25 до 49 - ясно выраженная реакция (++);
от 50 до 75 - резко положительная реакция (+++).
Полученые результаты внести в протокол.
Фагоцитарный показатель у здорового человека - 70-84%.
Фагоцитарное число у здорового человека - 4-?.
Фагоцитарное число после обработки микробов антителами (им-
мунной сывороткой) или комплементом -
Опсонический индекс - больше 1.
Фагоцитоз культуры стафилококка или микрококков в отсутствие
антител идет плохо, при наличии антител в сыворотке или плазме
фагоцитоз ускоряется, при добавлении комплемента или активации
комплемента в крови исследуемого фагоцитоз резко ускоряется,
т.к. происходит как через Fc-, так и через С3в-рецепторы.
2Оценка степени перекисного и радикального окисления
2по НСТ-тесту 0 (NBT-тест)
1Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест)
Тест бессубстратного восстановления нитросинего тетразолия
основан на способности фагоцитов утилизировать кислород с обра-
зованием высокореактогенных свободных радикалов. НСТ является
индикатором респираторного взрыва. Сущность метода заключается
в образовании нерастворимых окрашенных зерен формазана при
восстановлении НСТ супероксидным радикалом.
Метод высокоинформативен
- для оценки функциональной активности фагоцитов,
- прогнозирования тяжести заоблевания,
- контроля за эффективностью антибактериального лечения,
- дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных за-
болеваний и пр. /2291к/
- Получены доказательства высокого уровня корреляции между
образованием активных форм кислорода и киллингом.
Метод Н.Е.Виксмана, А.Н.Маянского (1979). Изучаемые образцы
веществ в количестве 20 мкл вносили в лунки иммунологического
планшета, в контрольные лунки - 20 мкл среды 199. В каждую из
лунок вносили по 20 мкл цельной крови, взятой из пальца здоро-
вых людей пипеткой, предварительно промытой раствором гепарина
250 ед/мл и добавляли 20 мкл 0,15% суспензии нитросинего тетра-
золия (Reanal, Венгрия) на 0,1 М фосфатном буферном растворе,
рН 7,2. Содержимое лунок осторожно перемешивали и инкубировали
при температуре 37 5о 0С в течение 30 минут, встряхивая планшеты
каждые 10 минут. После инкубации содержимое перемешивали, гото-
вили мазки и высушивали на воздухе. Готовые мазки фиксировали
метанолом 10 минут, высушивали и докрашивали 0,5% раствором
сафранина.
В качестве активаторов фагоцитов рекомендуется использовать
опсонизированный зимозан или акктиватор протеинкиназы С - фор-
болмиристат ацетат. /2291к/
Об интенсивности радикалообразования судят по количеству ди-
формазана, который откладывается в виде грубодисперсных темно-
синих гранул внутри или на поверхности активированного нейтро-
фила. /7062/
При микроскопии в каждом мазке подсчитывали 100 нейтрофи-
лов, среди которых определяли процент клеток, содержащих отло-
жения диформазановых гранул (НСТ-позитивные нейтрофилы). Далее
расчитывали индекс активации нейтрофилов (ИАН) по формуле:
А х 0 + Б х 1 + В х 2 + Г х 3
ИАН = ─────────────────────────────────── ,
100
где: А - количество клеток, не содержащих диформазановых отложе-
ний;
Б - количество клеток, в которых площадь отложений диформа-
зана не превышает 1/3 площади ядра;
В - количество клеток, в которых названные отложения зани-
мают от 1/3 до всей величины ядра;
Г - количество клеток с диформазановыми отложениями по пло-
щади превосходит площадь ядра.
НСТ-тест может быть сделан без дополнительной стимуляции
(спонтанный НСТ-тест) или после стимуляции нейтрофилов in vitro
(индуцированный НСТ-тест). /7062/
При патологии чаще ПОЛ растет. Поэтому если лечение выбрано
правильно, то процент активированных нейтрофилов быстро падает,
опережая динамику лейкоцитарных сдвигов, СОЭ и др. /7062/
Сниженные показатели НСТ-теста ── 76 0 неблагоприятный исход
(сепсиса)
Повышенные показатели НСТ-теста ── 76 0 опасность развития гной-
ных осложнений после операции.
Нормальные показатели НСТ-теста ── 76 0 успешная терапия. /1365к/
[Преципитат с НСТ может образовывать гепарин. /1575к/90/]
На стекла с прилипшими клетками капают 5 капель (0,14 мл)
1,03% раствора нитросинего тетразолия (17мг на 14 мл).
2Лизосомально-катионный тест (ЛКТ)
Растворами исследуемых полипептидов по 50 мкл заполняли лун-
ки иммунологического планшета, в которые вносили по 20 мкл
цельной крови здоровых доноров, взятой со скарифицированной
ранки пальца руки при помощи пипетки, предварительно промытой
раствором гепарина 250 ед/мл. Полученную взвесь клеток крови
инкубировали 1 час при температуре 37С. После инкубации готови-
ли мазки, сушили на воздухе при комнатной температуре и окраши-
вали по методу В.Е.Пигаревского и соавт. (1981) в 0,1 % забуфе-
ренном спиртовом растворе зеленого прочного с рН 8,2 в течение
20 минут. Дополнительную окраску мазков проводили 0,25% водным
раствором азура А. Окрашенные препараты промывали дистиллиро-
ванной водой, высушивали на воздухе и микроскопировали с ис-
пользованием масляной иммерсии.
При исследовании просматривали 100 гранулоцитов. Внутрик-
леточное содержание катионных белков крови оценивали полуколи-
чественно по величине среднего цитохимического коэффициента
(СЦК), вычисляемого по формуле:
3а + 2б + 1,5в + 1г + 0,5д + 0а
СЦК = ─────────────────────────────────────────,
100
где: а-е - количество однотипных клеток с определенной степенью
окрашиваемости цитоплазмы зеленым прочным, а цифры
показывают степень выраженности окраски;
0 - отсутствие окраски;
0,5 - наличие в цитоплазме единичных окрашенных гранул;
1 - половина цитоплазмы заполнена светлоокрашенными гра-
нулами;
1,5 - цитоплазма равномерно заполнена гранулами, окрашен-
ными в светло-зеленый цвет;
2 - цитоплазма содержит 1/3 часть своей площади темно-
зеленых гранул;
3 - цитоплазма содержит 2/3 части своей площади темно-
зеленых гранул.
.
2Определение хемотаксической активности лейкоцитов
Недостаточный хемотаксис сдерживает мобилизацию фагоцитов,
способствуя опережающему размножению бактерий. Снижение мигра-
ционной активности нейтрофилов в 2 раза сопровождается затяжным
торпидным течением пневмонии более чем у 50% детей. /7062/
ш0.7 Снять ? 2НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ 0 (ПРОДОЛЖЕНИЕ) ЭНДОЦИТОЗ И ЭКЗОЦИТОЗ Фагоциты способны осуществлять ┌──^
Моноциты/макрофаги
Факторы неспецефической защиты - первая лекция: Перикиси, свободные радикалы. ПОЛ, ФНО, БОФ (белки острой фазы), нуклеазы, фибронектины, интерферон, лизоцим, катионные белки, NO, лектины
Лимфоциты
Иммунология репродукции
Селезенка - орган иммунной системы
В-Лимфоциты
Все об антигенах
Вскармливание
Методическая разработка по практическому занятию для студентов лечебного факультета
Классификация витаминов
Copyright (c) 2024 Stud-Baza.ru Рефераты, контрольные, курсовые, дипломные работы.